食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法

　　1、适用范围

　　本方案适用于液态奶、酸奶、酱油、醋、饼干、奶酪、奶茶、可乐和果冻中三氯蔗糖的检测，

方法定量限7.5 mg/kg。

　　2、标准品配制

　　标准储备溶液：准确称取标准品，用水配制成10 mg/mL的储备液，吸取一定体积10 mg/mL储备

液用水配成浓度为1000 μg/mL的储备液。

　　3、提取

　　3.1 含蛋白脂肪类液体：液态奶、酸奶、酱油和醋

　　10 mL样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm

离心5 min，取10 mL上清液，待净化;

　　3.2 含蛋白脂肪类固体：饼干、奶酪和奶茶

　　5 g样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离

心5 min，取10 mL上清液，待净化;

　　3.3 饮料：可乐(量取前超声排气泡)

　　10 mL样品，加入10 mL 水，混匀，取10 mL，待净化;

　　3.4 果冻

　　5 g样品，加入5 mL 水，热水超声溶解，混匀，趁热净化。

　　注：《GB 222552014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定》中提取液为75%甲醇

水溶液，减压浓缩过程中暴沸严重，不易操作。

　　4、净化——ProElut 200 mg/6 mL PLS(Cat.#：68012)

　　(1)活 化：依次向柱中加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液;

　　(2)上 样：将待净化液加入柱中，弃去流出液(控制流速不超过每秒1滴);

　　(3)淋 洗：

　　(4)洗 脱：向柱中加入5 mL 20%甲醇水溶液，弃去流出液;

　　向柱中加入3 mL甲醇，收集流出液;

　　(5)定 容：将洗脱液在50 ℃下减压蒸干，用流动相定容至1 mL，供HPLC分析。

　　5、色谱条件

　　色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 × 4.6 mm，5 μm(Cat.#：99601)

　　流速：1.0 mL/min

　　进样量：20 μL

　　柱温：35 ℃

　　检测器：SEDEX LTELSD，温度：40℃，压力：3.5 bar，Gain：6

　　流动相：A：水;B：乙腈

　　梯度设置

　　时间/Min.01415222330

　　A(%)898910108989

　　B(%)111190901111

　　6、添加回收结果

　　食品中三氯蔗糖的HPLC检测的添加回收结果

　　添加水平200 mg/kg添加水平20 mg/kg添加水平7.5 mg/kg空白含量(μg/mL)

　　回收率(%)加标量回收率(%)加标量回收率(%)加标量

　　早餐奶99.0110 mg/mL 200 μL109.821000 μg/mL

　　200 μL96.521000 μg/mL

　　75 μL—

　　巧克力奶99.7010 mg/mL 200 μL100.911000 μg/mL

　　200 μL95.881000 μg/mL

　　75 μL—

　　咖啡奶100.3410 mg/mL 200 μL112.341000 μg/mL

　　200 μL126.001000 μg/mL

　　75 μL—

　　养乐多128.8310 mg/mL 200 μL————130.8

　　酸奶——105.581000 μg/mL

　　200 μL123.421000 μg/mL

　　75 μL—

　　酱油77.8510 mg/mL

　　200 μL————113.48

　　醋108.2210 mg/mL

　　200 μL143.641000 μg/mL

　　200 μL205.471000 μg/mL

　　75 μL—

　　饼干——102.641000 μg/mL

　　100 μL103.281000 μg/mL

　　37.5 μL—

　　奶酪——88.041000 μg/mL

　　100 μL82.781000 μg/mL

　　37.5 μL—

　　奶茶——101.481000 μg/mL

　　100 μL169.051000 μg/mL

　　37.5 μL—

　　可乐——103.971000 μg/mL

　　200 μL98.491000 μg/mL

　　75 μL—

　　果冻——93.891000 μg/mL

　　100 μL96.271000 μg/mL

　　37.5 μL—